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脉冲场电泳系统操作规程

脉冲场电泳系统操作规程

 

一、开机

  1. 检查管道系统,确认管道连接密闭,不漏气。

  2. 在电泳槽呢加入约2.2升合适的电泳缓冲液。

  3. 接通主机和冷却泵电源,开启主机开关,主机自检结束后,开启冷却泵开关。

  4. 按冷却泵的“set temp”键调节需要的电泳温度,一般为14。按“actual temp”显示实际的温度。调节蠕动泵的速度为100

二、电泳

  1. 开机半小时后,将灌胶框放入电泳槽中,框子上的突起对准电   泳槽上的小孔;加好样的凝胶连同灌胶架的垫片一起放入框内。

  2. 检查缓冲液的高度,确保缓冲液超过胶面1-2cm

  3. 盖好电泳槽盖,将冷凝泵速度调节至“50”

  4. 在主机上设置电泳程序(最简单的办法是按“auto algorithum”键,键入欲得到的线性范围的最大和最小Kb数,确认所给出的参数。最常用的参数如下:电压:6V/CM;脉冲角度120o;脉冲转化时间:Int.Sw.Time=30sFin.Sw.Time=90s;电泳时间:18小时;脉冲转换时间的变化系数:线性。脉冲转换时间和电泳时间因不同的样品而定,需要在实验中优化)。按“start”键,开始电泳。此时可观察到电泳槽内电极开始出现气泡。仪器显示实际的电流。

三、关机

  1. 电泳结束后,“high voltage”灯灭。依次关掉冷凝系统,主机开关,然后打开电泳槽,取出凝胶,进行染色等操作。

注意

电泳开始后,“high voltage”灯亮,此时切不可打开电泳盖进行操作,以免触电。