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双向电泳第一向等点聚焦操作规程

双向电泳第一向等点聚焦操作规程

 

一、等电聚焦步骤

  1. 从冰箱中取出-20冷冻保存的水化上样缓冲液,置室温溶解。

  2. 型冰箱中取出-20冷冻保存的TPG预制胶条,室温放置10min

  3. 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘从左而右线性加入样品。在槽   两端各1cm左右不要加样,中间的样品液一定要连贯。

    注意:不要产生气泡。否则影响到胶条中蛋白质的分布。

  4. 当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后,用镊   子轻轻地去除预制胶条上的保护层。

  5. 分清胶条的正负极,轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或   水化盘中溶液上,是的胶条的正极(标有+)对应于聚焦盘的正极。   确保胶条与电极紧密接触。不要使样品溶液弄到胶条背面的塑料支   撑膜上,因为这些溶液不会被胶条吸收。同样还要注意不使胶条下   面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡,用镊子轻轻地提起胶条的   一端,上下移动胶条,直到气泡被赶到胶条以外。

  6. 在每根胶条上覆盖2-3ml矿物油,沿着胶条,使矿物油一滴一滴   慢慢加在塑料支撑膜上。

  7. 对好正负极,盖上盖子。

  8. 设置等点聚焦程序。

二、等点聚焦结束后样品的处理

  1. 聚焦结束的胶条。立即平衡,进行第二向SDS-PAGE电泳,否则将胶条置于-20冰箱保存。