一、样品要求：
1.DNA纯度：OD260/OD280=1.6-2.0；
2.DNA用量：PCR产物：10-30ng; 质粒，双链DNA：150-300ng；
3.引物浓度：3.2pmol/ul.
二、PCR扩增程序
96℃1min.→(96℃10sec. →50℃5sec. →60℃4min.)×25个循环→4℃保温。
三、反应体系
10ul反应体系：BigDye0.5ul； sequencing Buffer(5×)1.8ul；模板：150-300ng(质粒)；用去离子超纯水补充到10ul。
四、PCR产物纯化
96孔板，酒精/EDTA/NaAc法。（1）每管加入25ul 100%酒精，1ul 125mM EDTA,1ul 3M NaAc，轻微离心，室温放置15min.；（2）9600rpm离心15min，弃去上清夜。（3）每管加入50ul70%酒精，震荡，9600rpm离心15min弃去上清液.(4)重复第（3）步一次。（5）让残余的酒精在室温下挥发干，加入10ul Hi-Di Formamide轻离，95°变性4min，迅速置冰中冷却4min后，再上机电泳。
五、开机
1.打开电瓶后开关，听到“咔”一声后，再按下前面“on”按纽，这时全部指示灯变绿。
2.打开计算机。
3.按下3130XL主机开关（左面第一个），等中间指示灯由黄变绿后，表明开机完成。
六、编程
由Run 3130XL Data collect软件完成。
七、上样电泳
数据收集单96孔板，需电泳6个小时，双96孔板，需电泳12个小时。电泳时绿色指示灯连续闪烁，电泳完成后指示灯保持稳定。
八、关机
关掉主机开关，关掉计算机，先按下电瓶前边“off”按纽，“beep”声过后，指示灯变绿后，关掉后部电源开关。
注意
保持室内卫生；操作时，必须戴手套和口罩，以免中毒；废物放入指定地点，以免污染环境。